磁珠的构成、吸附DNA的原理
一般磁珠由三层构成,最里面是聚苯乙烯,外面包裹一层磁性物质四氧化三铁,最外面再包一层官能基团修饰的高分子材料,上面偶联不同的官能团。不同功能的磁珠,偶联的官能团不同,纯化核酸用的一般是羧基(-COOH)。
当然不仅磁珠应用在核酸制备上,在化学发光、细胞分选、蛋白纯化等应用磁珠依然是大显身手,是因为不同的官能基团,或者偶联其他,如蛋白抗体等。
(1)反应体系中,较高浓度的 PEG 和 NaCl 导致 DNA 分子水化层脱去,DNA胶体热力学稳定性破坏,构象也随之改变,DNA分子发生聚集沉淀,带负电荷的磷酸基团大量暴漏在外面;
(2)带电荷的磷酸基团通过 Na^+^与羧基形成“离子桥”,使得 DNA 被特异吸附到带羧基的磁珠表面。(该过程是可逆的,在适当条件下,结合的 DNA 分子可以被洗脱回收)
磁珠双选非常大程度依赖于PEG:PEG作为一种分子拥挤试剂,达到一定的浓度时,夺取了一定的水,溶液环境变化,会使较大DNA的结构变紧凑,发生坍塌性的转变而凝聚。不同长度的DNA构象稳定性不同,在遵循热力学规律的情况下,溶液环境与分子拥挤试剂的浓度有很大的关系。即在特定的溶液中,当PEG浓度达到某一临界值时,就会发现一定大小以上的DNA分子构象非连续的发生凝聚。
(1)DNA越长:表面出来带负电的磷酸基团越多,整条分子带的负电就更强,更容易吸附到磁珠,只需要较低浓度的PEG和NaCl,就能回收(需要加入的磁珠体积更小)。
(2)DNA越短:就需要更高浓度的PEG和NaCl,将其表面的水化层破坏得更彻底,出来足够多带负电的磷酸基团,才能被磁珠吸附住,从而回收回来(需要加入的磁珠体积更大)。
此外,体系中的PEG还能增加溶液的粘稠度,让磁珠保持悬浮不容易沉聚,在DNA binding过程中更充分与DNA接触,同时PEG也不易造成蛋白变性和非特异性吸附。但是PEG的DNA沉聚效果容易收到pH、温度等的影响,温度过低PEG也不易与水完全互溶,所以磁珠一般都要求室温平衡后再用,其储存buffer里也会加一些低浓度的pH稳定剂,如Tris-HCl等。
酒精清洗:第一,DNA在这个浓度的酒精里溶解度很低;第二,DNA这样一个时间段是聚集状态,磁珠刚好提供一个聚集的奇点,让DNA沉聚在其周围,所以绝大部分DNA不会掉下来。但酒精浓度很重要,一般都要求新鲜配制。浓度太低,盐离子可以清洗得更干净,但是体系中过多的水会将部分DNA从磁珠上溶解下来,造成DNA损失,DNA的回收率可能会收到影响。浓度越高,体系中水越少,清洗盐离子的能力减弱,可能会使盐离子清洗不干净,但DNA的溶解度小,回收率高;
DNA洗脱:酒精清理后,先需要晾干磁珠上残留的酒精,以防影响下游实验。(注意晾干时磁珠表面无光泽即可,过度干燥,体系失水过多,会导致磁珠DNA进一步聚集,最终DNA很难回溶到水中,影响回收率)晾干后加入水或者TEbuffer,这时体系中已无钠离子和PEG,没办法形成电桥结构,带负电的DNA和磁珠之间相排斥,水重新包裹DNA形成水化层,使其从磁珠上洗脱下来,溶解到溶液中。
芯的损耗较小.整个器件是一个低损耗,高Q特性的电感。这种电感易引起谐振.因此在低频段有时也许会出现使用铁氧体
科学研究的基础,随着基因诊断、转基因食品检测、个性化医疗等的加快速度进行发展,现在的核酸提取技术已不能够很好的满足当今生物技术的需要,急需能够高通量、自动化的核酸提取方法。在这种背景下,
(结合)目标物质的小珠子。之所以它神奇,是因为它的用途很多!具体有哪些呢?
磁性能,因此在各种领域存在广泛的应用。以下是一些主要的应用方面: 1. 生物医学领域:铁氧体
主要由铁氧体材料和导体线圈组成的叠层型独石结构,属于电感、线圈类。具体来说,贴片
的主要的组成原材料是铁氧体,这是一种立方晶格结构的亚铁磁性材料,通常是由铁镁合金或铁镍合金制成。它的
元素 /
【RK3562J开发笔记】MCP2518FD外部CAN-FD控制器的调试方法
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